技术支持
以下是您在使用NatureStandard标准对照品进行检测时可能会遇到的一些问题,我们在此为您提供了解答,如果您还有其他技术问题,请联系我们的技术支持人员(tech@nature-standard.com , 86-21-51320077)。
问题1:为何样品实际检测的含量与NatureStandard提供的检测报告中的含量不一样?
答:由于我们对标准对照品含量的检测方法目前采用的是归一化法,因此检测所采用的波长和其他条件对检测结果有很大的影响。请严格按照检测报告中提供的条件进行检测,并确保您的HPLC仪器的检测灯能量充足。如果仍存在问题,请将您的样品检测条件和检测报告email或传真给我们(tech@nature-standard.com,86-21-51320077),我们会及时与您联系。
问题2:为何样品检测时经常会发生严重的峰拖尾现象?
答:峰拖尾是在HPLC检测中经常会出现的问题,一般情况下与样品和柱效有很大的关系。苷类样品和酸碱类样品均有拖尾的现象,但一般不是很严重,可以通过添加易挥发的酸或碱就可以解决这个问题。如果您的检测图谱中出现严重拖尾,请将您的保护柱卸掉以后再进样检测。如果仍存在问题,请将您的样品检测条件和检测报告email或传真给我们(tech@nature-standard.com,86-21-51320077),我们会及时与您联系。
问题3:如何评价检测器信噪比指标?
答:您可能会在实验中发现,同一样品溶液在不同检测器中的响应值存在明显差异,这是由于色谱分析主要使用相对比较的间接测定方法,其使用实际上并没有受到多少影响,难以简单认定仪器存在问题,但由于信噪比发生了变化,上述噪音、基线漂移的参数就不能用来评价检测器的灵敏度性能了。此时,直接使用信噪比来评价检测器的灵敏度性能才是可靠和准确的方法。
测定信噪比需要测定响应值,一般选定的样品推荐萘和L-苯丙氨酸等在254nm附近有吸收的物质,前者常用于色谱柱性能评价,后者无毒且对仪器可能存在的偏振现象敏感。根据现有信噪比测定方法,在选定特定浓度的样品后,先在选定波长平衡检测器(此时检测器中的溶液为溶解评价样品的溶剂),待基线稳定后,将配制好的样品溶液直接灌注到仪器的流路并充满其中,注意不要灌入气泡,信号稳定后再用溶剂将样品溶液冲出来。测定基线上下波动的幅度为噪音值(N),测定基线中值与样品信号中值的差为信号值(S)。则信噪比为两者的比值(S/N)。
使用信噪比(S/N)指标评价检测器,可以更准确全面地评价各种检测器的灵敏度性能。评价时可以参考现有的信噪比测定方法,建议用254nm作为检测波长,选择简单易得的样品,浓度值的选定应使信噪比的值在10以内,以方便测量。配制特定浓度的评价溶液后,以灌注法测定此时相对溶剂的响应值S,测定和计算出信噪比的值,作为该检测器对特定评价样品溶液的信噪比评价指标的值。
问题4:为何在检测标准对照品时图谱中出现双峰?
答:对照品是单一组分,出现这种情况,问题则可能在于色谱柱,如柱头塌陷、被污染及筛板堵塞等均会导致双峰,此时您需要对色谱柱的柱效进行测试。
问题5:为何在重复检测时峰面积一次比一次小?
答,首先您需要检测HPLC系统压力是否稳定、是否漏液等情况,然后将进样阀多次清洗。此外,还需确定样品是否对光、热敏感。排除以上因素后,如问题仍然没有解决,则应检测仪器的检测器是否能量不够,或自动进样器的六通阀的转子和定子的切换有点出入。
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